2019游艇会官网手机版我们的一位记者试图做CRISPR。他悲惨地失败

2020-02-20 12:23:43作者:admin来源:未知

  2019游艇会官网手机版我们的一位记者试图做CRISPR。他悲惨地失败咱们的一位记者试图做CRISPR。他祸患地腐烂 我讲一口流通的生物,而是被称为CRISPR新鲜的基因组编辑器械的分子繁杂性给我留下的不知所措,当我细读宇宙膨胀的声明。于是,我决策考什么一名考核员告诉我:CRISPR(即“集群每每互相间隔短回文反复”)听起来吓人,但它是如许简陋易用,“任何傻瓜”能做到这一点。我会碰运气。CRISPR时成效最佳瘫痪,或敲除,基因,于是这即是我挑选行使它。但我的主意很高:我指定的免疫基因,我推论,恐怕导致睹地删除由病毒兹卡形成的欺负。(我认可野生假设是基因,CD32,恐怕有帮于鼓舞寨卡病毒假若一私人以前被沾染登革热将自己复造到更高的程度,并有抗体到病毒。)罗兰·瓦格纳,正在萨米特昌达正在桑福德伯纳姆Prebys医学研讨所发方今圣迭戈,加利福尼亚州的试验室的博士后,许诺担负我的CRISPR师长。一位体会丰厚的攀岩者最初来自奥地利,瓦格纳亲密十足有层有次。他翻出了CD32基因的序列,此中有五个差别的卵白质编码区域。假若咱们正在一个区域切割的DNA,基因很恐怕会被减少:将不再使其卵白。 CRISPR行使由RNA的引扶引导CRISPR相闭卵白的分子铰剪一面,或Cas9到正在基因组中切确雀斑。咱们能够买启发RNA(gRNA),但这个思法appalls瓦格纳。“我会假设它恐怕$$ 500买gRNA,但我不知晓,”他说。“咱们正正在做咱们自身和咱们花约5 $$。“该gRNA序列必需正在CD32基因的片断互补的20个核苷酸的延迟,咱们要切。不过,同样的DNA序列能够正在基因组的其他地方再次展示,导致分子铰剪剪错了地方。云云的“脱靶”效应恐怕会导致错杂,并排斥他们的是那些锤炼他们的工夫CRISPR一个环节主意。为了使竞赛更的确地,Cas9须要一个出格的序列侧翼的靶向20个核苷酸:NGG,此中“N”能够是任何核苷酸。凡Cas9发觉NGG紧接20个核苷酸,它珍爱并翻开双螺旋,使gRNA贯串。Cas9然后切割DNA的每条链。要自造咱们gRNA,瓦格纳拷贝咱们一经确定了CD32片断的序列,并将其粘贴到一个免费的数据库,优化安排CRISPR,即寻找一个成婚的一组20个核苷酸之后NGG。境内有CD32 41个选项。皇冠国际平台是不是真的赚钱:iPhoneXS最大VS。华为,数据库扫描整私人类基因组,看看是否有相通的成婚脱靶裁减其他地方的潜力网站。咱们挑选展示特别的序列,然后他去到另一个网站和订单DNA安的拉伸寡核苷酸与序列。该寡来到,而我失落了我确当代汲取童贞。我没有正在一个试验室事情,由于我比30年前的本科。那光阴,我学到了移液时间,恐怕被出现由途易斯·巴斯德:我把手指正在我的嘴里,然后吸入的化学成细玻璃管,用我的指尖封盖,当我拟定了足够。 方今,正在瓦格纳的试验室事情台上,我面临花哨小玩意塑料的架子,看起来像水枪,但行使户可以吸起来的液体切确微升用按一个按钮。我的做事是从一个小小的试管寡汲取到另一个。第二管坚持质粒,其是DNA的一个圆形片,将动作一个木马。这种质粒,定造CRISPR试验,一经具有了Cas9基因。它还蕴涵了一个60个核苷酸的“发夹”序列,最终将贯穿到20个核苷酸我增加,使全gRNA。我用花式移液器之一寡聚转移到质粒管中,我还增加缓冲液,水和酶。假若十足平常,所述酶将切开该质粒,去除一块其DNA并首肯该寡核苷酸以庖代其职位。通盘的不顺遂。“哎呀!“瓦格纳说,由于我汲取酶。“你没有一点点。“我分明浸没尖到液体之前打正在吸管按钮。末了,我办理的流程。守候后的化学反映的发作,咱们把我的CRISPR质粒电泳机,有电线钩住它托盘。咱们增加的液体的迅速蜕化为明胶,然后我汲取我的CRISPR质粒几滴到筑筑上的差别车道。我翻转开闭以施加电流,应基于重量的DNA折柳成带。小片DNA我的切出与酶应酿成明白的带。我的凝胶电泳仅具有一个条带,从质粒。“它看起来并不像它的事情,”瓦格纳说,2019游艇会官网手机版我们的一位记者试图做CRISPR。他悲惨地失败轻轻地。“我不生气通盘的挑剔,但它恐怕是你搞砸酶与你的移液。“他能够说,当他起源了他的试验往往腐烂。“我思回家,我会说,我恨我的生计,”他透露。“有良众科学的曲折。“我一经会意到,任何傻瓜不行做CRISPR:这须要,起码,根基工夫试验室。瓦格纳举办平行试验跟我正在一道,他的质粒适应贯串,将启发Cas9到它的主意寡。然后,咱们哄从胚胎肾造成的细胞系为占用木马质粒。几天后,咱们折柳从细胞中的DNA,用会集酶链反映放大它,而且应用电泳以证实CD32基因一经被切割成片。瞧,咱们的事情减少赛。“你做得很好,”瓦格纳告诉我。“要走的途!“我没有做很大。但CRISPR他的事情的。

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